Romanowsky flekk - Romanowsky stain
.jpg)
Romanowsky -farging , også kjent som Romanowsky - Giemsa -farging , er en prototypisk fargeteknikk som var forløperen til flere forskjellige, men lignende flekker som ble mye brukt i hematologi (studiet av blod) og cytopatologi (studiet av syke celler). Flekker av Romanowsky-type brukes til å differensiere celler for mikroskopisk undersøkelse i patologiske prøver, spesielt blod- og benmargsfilmer , og for å oppdage parasitter som malaria i blodet. Flekker som er relatert til eller avledet fra flekker av Romanowsky-typen inkluderer flekker fra Giemsa , Jenner , Wright , Field , May-Grünwald og Leishman . Fargeteknikken er oppkalt etter den russiske legen Dmitri Leonidovich Romanowsky (1861–1921), som var en av de første som gjenkjente potensialet for bruk som en blodflekk.
Mekanisme
Verdien av Romanowsky -farging ligger i dets evne til å produsere et bredt spekter av nyanser, slik at mobilkomponenter lett kan differensieres. Dette fenomenet omtales som Romanowsky -effekten , eller mer generelt som metakromasi .
Romanowsky -effekt
I 1891 utviklet Romanowsky en flekk ved bruk av en blanding av eosin (typisk eosin Y ) og eldre oppløsninger av metylenblått som dannet nyanser som ikke kan tilskrives fargekomponentene alene: særegne lilla nyanser i kromatinet i cellekjernen og i granulat i cytoplasma av noen hvite blodlegemer. Dette ble kjent som Romanowsky- eller Romanowsky-Giemsa-effekten. Eosin og rent metylenblått alene (eller i kombinasjon) gir ikke Romanowsky -effekten, og de aktive flekkene som produserer effekten anses nå å være azurblå B og eosin.
Polykromert metylenblått
Flekker av Romanowsky-type kan lages enten av en kombinasjon av rene fargestoffer eller av metylenblått som har blitt utsatt for oksidativ demetylering , noe som resulterer i nedbrytning av metylenblått til flere andre flekker, hvorav noen er nødvendige for å produsere Romanowsky-effekten . Metylenblått som har gjennomgått denne oksidative prosessen er kjent som "polykromet metylenblått". Polykromi metylenblått kan inneholde opptil 11 fargestoffer, inkludert metylenblått , asur A , asur B, asur C, thionin , metylen fiolett Bernthesen, metyl thionoline og thionoline. Den eksakte sammensetningen av polykromert metylenblått avhenger av metoden som brukes, og til og med partier av flekken fra samme produsent kan variere i sammensetning.
Selv om azurblå B og eosin har vist seg å være de nødvendige komponentene for å produsere Romanowsky -effekten, har disse flekkene i deres rene former ikke alltid blitt brukt i formuleringen av fargeløsningene. De opprinnelige kildene til azurblå B (et av oksidasjonsproduktene av metylenblått) var fra polykromede metylenblå løsninger, som ble behandlet med oksidasjonsmidler eller tillatt å eldes naturlig i tilfelle av Romanowsky. Ernst Malachowsky i 1891 var den første som med vilje polykrommetylenblått til bruk i en flekk av Romanowsky-type.
Typer
May-Grünwald-Giemsa
May-Grünwald-Giemsa-flekken er en to-trinns prosedyre som inkluderer første farging med May-Grünwald-flekk, som ikke gir Romanowsky-effekten, etterfulgt av farging av Giemsa-flekken som gir Romanowsky-effekten.
Wrights og Wright-Giemsa flekker
Wrights flekk kan brukes alene eller i kombinasjon med Giemsa-flekken, som er kjent som Wright-Giemsa-flekken. Wrights flekk er oppkalt etter James Homer Wright som i 1902 publiserte en metode som bruker varme til å produsere polykromert metylenblått, som kombineres med eosin Y. Den polykromede metylenblå kombineres med eosin og får utfelling, og danner et eosinat som gjenoppløses i metanol . Tilsetningen av Giemsa til Wrights flekk øker lysstyrken til den "rødlilla" fargen på de cytoplasmatiske granulatene. Wrights og Wright-Giemsa-flekker er to av Romanowsky-type flekker som er vanlig i USA og brukes hovedsakelig til farging av blod- og benmargsfilmer.
Leishman flekk
I 1901 utviklet William Leishman en flekk som lignet på Louis Jenner, men med erstatning av rent metylenblått med polykromert metylenblått. Leishmans flekk fremstilles fra eosinatet av polykromert metylenblått og eosin Y ved bruk av metanol som løsningsmiddel.
Giemsa flekk
Giemsa flekk består av "Azure II" og eosin Y med metanol og glyserol som løsningsmiddel. "Azure II" antas å være en blanding av azurblå B (som Giemsa kalte "azurblå I") og metylenblått, selv om den eksakte sammensetningen av "azurblå I" regnes som en forretningshemmelighet. Sammenlignbare formuleringer ved bruk av kjente fargestoffer har blitt publisert og er kommersielt tilgjengelige. Giemsa flekk anses å være standard flekk for påvisning og identifisering av malariaparasitten.
Klinisk betydning
Blod- og benmargspatologi
Romanowsky-type fargende er mye brukt i undersøkelse av blod, i form av blod filmer , og i den mikroskopiske undersøkelse av benmargsbiopsi og suge utstryk. Undersøkelse av både blod og benmarg kan være av betydning ved diagnostisering av en rekke blodsykdommer. I USA er Wright- og Wright-Giemsa-variantene av flekker av Romanowsky-typen mye brukt, mens i Europa brukes ofte Giemsa-flekk.
Påvisning av malaria og andre parasitter
Av flekker av Romanowsky-typen er Giemsa-flekken spesielt viktig for påvisning og identifisering av malariaparasitter i blodprøver . Malaria antigen -påvisningstester er et alternativ til farging og mikroskopisk undersøkelse av blodfilmer for påvisning av malaria.
Bruk i cytopatologi
Flekker av Romanowsky-type brukes også til farging av cytopatologiske prøver, for eksempel de som er produsert fra finnålsaspirater og cerebrospinalvæske fra lumbale punkteringer .
Historie
.jpg)
Selv om det eksisterer debatt om hvem som fortjener æren for denne generelle fargemetoden, har populær bruk tilskrevet Dmitri Leonidovich Romanowsky.
På 1870 -tallet brukte Paul Ehrlich en blanding av sure og basiske fargestoffer inkludert surt fuchsin (surt fargestoff) og metylenblått ( basisfargestoff ) for å undersøke blodfilmer . I 1888 brukte Cheslav Ivanovich Chenzinsky metylenblått, men erstattet sur fuchsin brukt av Ehrlich med eosin. Chenzinskys flekkkombinasjon var i stand til å flekke malariaparasitten (medlem av slekten Plasmodium ). Verken Ehrlichs eller Chenzinskys flekker ga Romanowsky -effekten ettersom metylenblått de ikke brukte var polykromert.
Dmitri Romanowsky publiserte i 1890 foreløpige funn av hans blodflekk (en kombinasjon av gammel metylenblått og eosin), inkludert resultatene når det ble påført malariainfisert blod. Denne bruken av polykromert metylenblått differensierte Romanowskys flekk (og de påfølgende formuleringene) fra de til Ehrlich og Chenzinsky, som manglet den lilla fargen assosiert med Romanowsky -effekten. Romanowskys publikasjon fra 1890 inneholdt ikke en beskrivelse av hvordan han modifiserte metylenblå løsningen, men i doktoravhandlingen fra 1891 beskrev han metylenblått best som brukt etter at det begynte å dannes mugg på overflaten. Annet enn bruk av en gammel metylenblå løsning, var Romanowskys flekk basert på Chenzinskys flekketeknikk. Romanowskys bruk av hans metode for å studere malariaparasitten har blitt tilskrevet den fortsatte interessen for fargemetoden hans.
Ernst Malachowsky har blitt kreditert for å ha observert samme flekkkombinasjon som Dmitri Romanowsky uavhengig i 1891, selv om han også har blitt kreditert for å være den første som gjorde det. Malachowsky var den første som brukte en bevisst polykromert metylenblå løsning, som Malachowsky oppnådde ved tilsetning av boraks til fargeblandingen. Det rapporteres at Malachowsky har demonstrert flekken 15. juni 1890, og samme år har han publisert et papir "som beskriver hans offentlige demonstrasjon". Både Romanowsky og Malachowsky fremgangsmåter var i stand til å sette flekker på kjernen og cytoplasmaet av malariaparasitten , når frem til dette punkt flekkene ble anvendt, hadde bare farget cytoplasma.
I 1899 utviklet Louis Leopold Jenner en mer stabil versjon av metylenblått og eosinflekker ved å samle bunnfallet som dannes i vannbaserte blandinger og gjenoppløse det i metanol . Flekker av Romanowsky-type fremstilt fra de oppsamlede bunnfallene er noen ganger kjent som eosinater . I tillegg til å øke flekkens stabilitet, hadde bruk av metanol i Jenners flekk virkning på å fikse blodprøvene, selv om Jenners versjon av flekken ikke gir Romanowsky -effekten.
Richard May og Ludwig Grünwald i 1892 publiserte en versjon av flekken (nå kjent som May - Grünwald -flekken ) som ligner den versjonen som ble foreslått av Jenner i 1899, og gir heller ikke Romanowsky -effekten.
I 1901 utviklet både Karl Reuter og William Leishman flekker som kombinerte Louis Jenners bruk av alkohol som løsningsmiddel og Malachowskys bruk av polykromet metylenblått. Reuter farve forskjellig fra Jenner i å bruke etyl-alkohol i stedet for methanol, og Leishmans skilte seg fra Jenner ved anvendelse av eosin B istedenfor eosin Y .
James Homer Wright publiserte i 1902 en metode som bruker varme til polykrom av metylenblått, som han kombinerte med eosin Y. Denne teknikken er kjent som Wrights flekk .
Gustav Giemsas navn har også blitt assosiert med flekken ettersom han blir kreditert for å ha publisert en nyttig formulering og protokoll i 1902. Giemsa forsøkte å bruke kombinasjoner av rene fargestoffer i stedet for polykromede metylenblå løsninger som er svært varierende i sammensetning. Giemsa solgte rettighetene til å produsere flekken hans, men publiserte aldri detaljer om hvordan han produserte den, selv om det antas at han brukte en kombinasjon av azurblå B og metylenblått. Giemsa publiserte en rekke modifikasjoner av flekkene hans mellom 1902 og 1934. I 1904 foreslo han å tilføre glyserin til flekken, sammen med metanolen, for å øke stabiliteten.
Giemsa flekkpulver produsert i Tyskland ble mye brukt i USA til avbruddet i forsyningen under første verdenskrig , noe som førte til økt utnyttelse av James Homer Wrights metode for polykromering av metylenblått.