H & E flekk - H&E stain

Netthinnen (del av øyet ) farget med hematoksylin og eosin , cellekjerner farget blå-lilla og ekstracellulært materiale farget rosa.

Hematoxylin og eosin flekk ( eller hematoksylin og eosin flekk eller hematoxylin-eosin flekk , ofte forkortet som H & E flekk eller HE flekk ) er en av de viktigste vev flekker som brukes i histologi . Det er den mest brukte flekken i medisinsk diagnose og er ofte gullstandarden . For eksempel, når en patolog ser på en biopsi av en mistenkt kreft , vil den histologiske delen sannsynligvis bli flekket med H&E.

H&E er kombinasjonen av to histologiske flekker: hematoksylin og eosin . Hematoksylinet flekker cellekjernene i en lilla blå farge , og eosin flekker den ekstracellulære matrisen og cytoplasma rosa, med andre strukturer som tar forskjellige nyanser, fargetoner og kombinasjoner av disse fargene. Derfor kan en patolog enkelt skille mellom de nukleære og cytoplasmiske delene av en celle, og i tillegg viser de generelle fargemønstrene fra flekken den generelle utformingen og fordelingen av celler og gir en generell oversikt over en vevsprøves struktur. Således gir mønstergjenkjenning, både av ekspertmennesker selv og av programvare som hjelper disse ekspertene (innen digital patologi ), histologisk informasjon.

Denne flekkkombinasjonen ble først introdusert i 1876 av A. Wissowzky.

Bruker

H & E -fargingsprosedyren er den viktigste flekken i histologi delvis fordi den kan gjøres raskt, ikke er dyr og flekker vev på en slik måte at en betydelig mengde mikroskopisk anatomi avsløres, og kan brukes til å diagnostisere et bredt spekter av histopatologiske forhold. Resultatene fra H & E -farging er ikke altfor avhengige av kjemikaliet som brukes til å fikse vevet eller små inkonsekvenser i laboratorieprotokollen, og disse faktorene bidrar til rutinemessig bruk i histologi.

H & E -farging gir ikke alltid nok kontrast til å differensiere alt vev, mobilstrukturer eller fordelingen av kjemiske stoffer, og i disse tilfellene brukes mer spesifikke flekker og metoder.

Påføringsmetode

Rack med objektglass som fjernes fra et bad med hematoksylinflekk.

Det er mange måter å tilberede hematoksylinløsningene (formulering) som brukes i H & E -prosedyren, i tillegg er det mange laboratorieprotokoller for å produsere H & E -fargede objektglass, hvorav noen kan være spesifikke for et bestemt laboratorium. Selv om det ikke er noen standard prosedyre, er resultatene etter konvensjon rimelig konsistente ved at cellekjerner er farget blå og cytoplasma og ekstracellulær matrise er farget rosa. Histologilaboratorier kan også justere mengden eller typen flekker for en bestemt patolog.

Etter at vev har blitt samlet (ofte som biopsier ) og fikset, blir de vanligvis dehydrert og innebygd i smeltet parafinvoks , den resulterende blokken monteres på en mikrotom og kuttes i tynne skiver. Skivene festes til objektglass av mikroskop, hvorpå voksen fjernes med et løsningsmiddel og vevskivene festet til objektglassene rehydratiseres og er klare for farging. Alternativt er H & E -flekk den mest brukte flekken i Mohs -kirurgi der vev vanligvis er frosset, kuttet på en kryostat (en mikrotom som kutter frossen vev), fikseres i alkohol og deretter farges.

H & E -fargemetoden innebærer påføring av hematoksylin blandet med et metallisk salt eller beitemiddel , ofte etterfulgt av skylling i en svak syreoppløsning for å fjerne overflødig flekker ( differensiering ), etterfulgt av blåsing i mildt alkalisk vann. Etter påføring av hematoksylin motvirkes vevet med eosin (oftest eosin Y ).

Resultater

Hematoxylin hovedsakelig farger de kjerner for cellene blå eller mørk-lilla, sammen med noen andre vev, slik som keratohyalin granuler og forkalket materiale. Eosin flekker cytoplasma og noen andre strukturer, inkludert ekstracellulær matrise som kollagen i opptil fem nyanser av rosa. De eosinofile (stoffene som er farget av eosin) strukturer består vanligvis av intracellulære eller ekstracellulære proteiner . De Lewy-legemer og Mallory legemer er eksempler på eosinofile strukturer. Det meste av cytoplasma er eosinofilt og gjengitt rosa. Røde blodlegemer er farget intenst rødt.

Handlingsmåte

Selv om hematein , en oksidert form av hematoksylin, er det aktive fargestoffet (når det kombineres med et mordmiddel), blir flekken fremdeles referert til som hematoksylin . Hematoxylin, når kombinert med et beisemiddel (vanligvis aluminium alun ) blir ofte ansett for å "ligne" en grunnleggende, positivt ladet, eller kationisk flekk. Eosin er en anionisk (negativt ladet) og sur flekk. Farging av kjerner ved hemalum (en kombinasjon av aluminiumioner og hematein) skyldes vanligvis bindingen av fargemetallkomplekset til DNA, men kjernefarging kan oppnås etter ekstraksjon av DNA fra vevsseksjoner. Mekanismen er forskjellig fra kjernefarging ved grunnleggende (kationiske) fargestoffer som tionin eller toluidinblått . Farging med basiske fargestoffer skjer bare fra løsninger som er mindre sure enn hemalum, og det forhindres ved tidligere kjemisk eller enzymatisk ekstraksjon av nukleinsyrer. Det er påvist at samordne bindinger, som ligner på de som holder aluminium og hematein sammen, binde den hemalum komplekse til DNA og til karboksygrupper av proteiner i atom kromatin .

Strukturene trenger ikke å være sure eller basiske for å bli kalt basofile og eosinofile; terminologien er basert på affiniteten til cellulære komponenter for fargestoffene. Andre farger, f.eks. Gul og brun, kan være tilstede i prøven; de er forårsaket av iboende pigmenter som melanin . Basale laminer må farges av PAS -flekker eller noen sølvflekker hvis de må være godt synlige. Retikulære fibre krever også sølvfarge. Hydrofobe strukturer har også en tendens til å forbli klare; disse er vanligvis rike på fett, f.eks. adipocytter , myelin rundt nevronaksoner og Golgi -apparatmembraner .

Eksempler på H&E fargede vev

Referanser

Videre lesning

• Kiernan JA (2008) Histologiske og histokjemiske metoder: teori og praksis. 4. utg. Bloxham, Storbritannia: Scion.
• Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Kjernefysiske flekker med oppløselige metakrom mordant innsjøfarger. Effekten av kjemiske endegruppeblokkerende reaksjoner og kunstig introduksjon av syregrupper i vev. Histokjemi 49: 23–35.
• Llewellyn BD (2009) Kjernefarging med alunhematoksylin. Bioteknologi. Histochem. 84: 159–177.
• Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Anvendelse av nåværende kjemiske konsepter på metall -hematin og -brazilein flekker. Histokjemi 85: 353–364.

Eksterne linker

• SIGMA-ALDRICH H&E Informasjonsgrunning

Protokoll

• Rutinemessig Mayers hematoksylin og eosinflekk (H&E)
• Hematoksylin og eosin (H&E) fargeprotokoll
• Rosen Lab, Institutt for molekylær og mobilbiologi, Baylor College of Medicine) Protokoll trinn for trinn