Flere elektroder aggregometri - Multiple electrode aggregometry
| Flere elektrodeaggregometri | |
|---|---|
 Multiplate Analyzer
| |
| Hensikt | Bestemme blodplatefunksjonen |
| Test av | Hele blodet |
Multiplate multiple electrode aggregometry (MEA) er en test av blodplatefunksjon i fullblod . Testen kan brukes til å diagnostisere blodplateforstyrrelser, overvåke blodplatebehandling, og blir også undersøkt som en potensiell prediktor for transfusjonskrav og blødningsrisiko ved hjertekirurgi.
Instrument
Multiplate MEA Analyzer (Roche Diagnostics International Ltd) har 5 kanaler for samtidig måling av flere prøver eller agonister . Instrument detekterer endringer i elektrisk impedans når blodplatene aggregerer på metallelektroder i test kyvetten . Hver kyvette inneholder to par sensorelektroder, som hver måler impedansendringen. Dupliseringssensorene fungerer som en integrert kvalitetskontroll, og analysen aksepteres hvis korrelasjonskoeffisienten til målingene er større enn 0,98. Forskjellen på hver kurve fra gjennomsnittskurven blir også beregnet, og en differanse på mindre enn 20% aksepteres. Test kyvetter inneholder også en teflonbelagt magnetisk rørestav. Økningen i impedans når aggregering skjer transformeres til aggregeringsenheter (AU) og plottes mot tid på dataskjermen.
Prøve
Produsenten anbefaler bruk av hirudin som antikoagulant for prøver som skal testes, men studier har vist at heparin er et godt alternativ. 300 µL blod er nødvendig for hver analyse, og blir fortynnet med samme mengde saltvann . Etter pipettering av blod og saltvann i kyvetten, inkuberes testen i tre minutter før den valgte agonisten tilsettes. Testen startes deretter, og blodplateaggregering registreres med omtrent 0,5 sekunders intervaller i seks minutter. Tre parametere beregnes: aggregering , hastighet og areal under kurven (AUC). Aggregering (i AU) er den maksimale høyde av aggregeringen kurve , og hastighet (i AU / min) blir den maksimale helling av kurven. AUC er den viktigste parameteren . Den er registrert i Enheter (U), og påvirkes av både høyden og hellingen til aggregeringskurven, og er det beste samlede målet for blodplateaktivitet.
Multiplattester / reagenser
| ADP | Adrenalin | Kollagen | Ristocetin | |
|---|---|---|---|---|
| P2Y-reseptor defekt | Redusert | Normal | Normal | Normal |
| Adrenerg reseptor defekt | Normal | Redusert | Normal | Normal |
| Collagen receptor defekt | Normal | Normal | Redusert eller fraværende | Normal |
| Normal | Normal | Normal | Redusert eller fraværende | |
| Redusert | Redusert | Redusert | Normal eller redusert |
ADPtest
Adenosindifosfat (ADP) er en blodplateagonist. Når det tilsettes saltvann fortynnet helblod i testkuvetten, stimulerer det ADP- reseptorene på blodplater, og aktiverer blodplatene. Aktivering av blodplatene fører til formendring og degranulering, og det frigjorte innholdet i granulatene aktiverer blodplatene ytterligere. Aktivering induserer også en konformasjonsendring i glykoprotein IIb / IIIa (GPIIb / IIIa) reseptoren, noe som gir den høy affinitet for fibrinogen . Binding av fibrinogen til GPIIb / IIIa reseptorer fører til blodplate-til-blodplatebroer og resulterer i blodplateaggregering. Antiplatelet medisiner som klopidogrel og prasugrel hemmer ADP-reseptoren P2Y12 irreversibelt , noe som fører til redusert ADP-indusert blodplateaggregering. Legemidler som hemmer GPIIb / IIIa-reseptoren, f.eks. Eptifibatid , kan også redusere eller eliminere ADP-indusert blodplatrespons.
ASPItest
I ASPItest tilsettes arakidonsyre til den saltoppløsningsfortynnede blodprøven. Arakidonsyre omdannes til prostaglandin H2 (PGH2) av cyklooksygenase-1 (COX1), og PGH2 omdannes deretter til tromboksan A2 (TXA2) ved tromboksansyntase . TXA2 øker blodplateaggregering, fremmer degranulering og stimulerer blodplateaktivering. Inhibering av COX1, som med acetylsalisylsyre , og inhibering eller fravær av GPIIb / IIIa-reseptor, som sett i Glanzmanns trombasthenia , vil redusere blodplateaggregering som respons på arakidonsyre.
KJOLEST
Kollagen tilsettes blandingen med saltvann og binder seg til kollagenreseptorer på blodplater. Dette fører til en frigjøring av arakidonsyre, som omdannes til den potente blodplateaktivatoren TXA2. COLtest er følsom overfor hemming av COX1 og GPIIb / IIIa og for Glanzmanns trombastheni .
RISTOtest
Ristocetin danner komplekser med von Willebrand-faktor (vWF) som binder seg til glykoprotein Ib (GP1b) reseptorer på blodplater, forårsaker blodplateaktivering og aggregering. Redusert eller fraværende aggregering som respons på ristocetin kan være forårsaket av mangel på eller reduksjon av vWF, sett i von Willebrand sykdom (vWD), eller fravær eller reduksjon i antall GP1b reseptorer, som i Bernard-Soulier syndrom (BSS). RISTOtest kan utføres i to konsentrasjoner; RISTOhøy og RISTOlow. I RISTOhigh påføres en ristocetin-konsentrasjon på 0,77 mg / ml. Dette induserer normalt en sterk blodplateaggregering, og lav eller fraværende aggregering kan være forårsaket av de tidligere nevnte forholdene vWD og BSS. I RISTOlow er ristocetin-konsentrasjonen bare 0,2 mg / ml, og på et nivå som normalt ikke induserer en sterk aggregeringsrespons. Denne testen kan oppdage om vWF viser en sterkere enn normal tendens til å samle blodplater, noe som kan sees i en undertype av vWD kalt vWDIIb.
TRAPtest
Trombinreseptoraktiverende peptid-6 (TRAP-6) aktiverer blodplater gjennom trombinreseptorprotease- aktivert reseptor-1 (PAR-1). Binding av TRAP-6 til PAR-1 forårsaker en konformasjonsendring i GPIIb / IIIa-reseptorene på blodplater, noe som gir dem høy affinitet for fibrinogen. Fibrinogen binder seg deretter til reseptorene, tverrbinder flere blodplater og forårsaker aggregering. Aggregering i TRAPtest kan være redusert eller fraværende i Glanzmanns trombastheni , der GPIIb / IIIa-reseptorer er få eller fraværende, eller hvis pasienten tar en GPIIb / IIIa- antagonist . Traptest har bare mindre følsomhet for hemming av COX1- og ADP-reseptorer.
ASA-reagens
Tilsetning av ASA ( acetylsalisylsyre ) reagens til en blodprøve reduserer aggregeringsresponsene i ASPItest og COLtest. ASA hemmer COX1 irreversibelt i blodplater, og hemmer derved produksjonen av TXA2. ASA-reagenset brukes som kvalitetskontroll i blodplatefunksjonstesting med Multiplate, slik at det kan vurderes unormale blodplatesvar i ASPItest og COLtest.
GPIIb / IIIa antagonistreagens
Dette reagenset brukes som kvalitetskontroll i multiplate blodplatefunksjonstesting. GPIIb / IIIa-antagonisten blokkerer bindingen av fibrinogen til GPIIb / IIIa-reseptorene, og forhindrer dannelsen av blodplatefibrinogenbindinger og resulterer i signifikant redusert blodplateaggregering som respons på alle agonister. Antagonistreagenset brukes sammen med TRAP-test, og tillater vurdering av en positiv kontroll.
Prostaglandin E1-reagens
Prostaglandin E1 (PGE1) er et blodplate- inhibitor som forårsaker en økning i cyklisk adenosin monofosfat (cAMP) i blodplater ved å stimulere til adenylyl cyclase aktivitet. cAMP er et intracellulært signalmolekyl , og økningen i cAMP hemmer kalsiummobilisering og blodplateaggregering indusert ved aktivering av ADP-reseptoren P2Y1. Aktivering av P2Y1-reseptoren initierer blodplateaggregering som respons på ADP. P2Y1-reseptoren er nødvendig for ADP-indusert blodplateaktivering, men er ikke tilstrekkelig for full blodplateaggregering som respons på ADP. cAMP hemmer blodplateaggregering, og reduserte mengder cAMP i blodplater fører til blodplateaggregering. PGE1-reagensen brukes sammen med ADP-testen for to formål: vurdering av ADP høy følsomhet (HS) og positive kontroller av ADPtest. Når en liten mengde PGE1 (20 ul) tilsettes ADPtest, induserer det en moderat inhibering av aggregering i normale prøver, men øker trombocytens følsomhet overfor inhibering av klopidogrel sterkt. Dette er grunnen til at den modifiserte testen kalles "High Sensitivity". Tilsetning av 50 ul PGE1 til ADPtest fører til en sterk hemming av ADP-indusert aggregering, og brukes til vurdering av positive kontroller av ADPtest.